产品货号：
YTC0826
中文名称：
3D培养细胞线粒体染色液(Mito-Tracker Green)
英文名称：
By3D Mito-Tracker Green Staining Solution
产品规格：
500T|2500T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是一种快速、便捷的用于3D培养的细胞球或类器官等的活细胞线粒体染色的溶液。仅需染色10分钟就可在荧光显微镜下观察到非常明亮的活细胞线粒体绿色荧光染色。和Rhodamine 123或JC-1相比，Mito-Tracker Green对于线粒体的染色不依赖于线粒体膜电位。Mito-Tracker Green只可以用于对活细胞的染色，细胞经过固定后会导致荧光会消失。
- 适用范围广：本制品可用于各种方法培养出的3D细胞球或类器官，包括超低吸附细胞培养板、MatrixBlab基质胶或Matrigel包被的平板、琼脂糖包被的平板、细胞悬滴培养板等。
- 使用便捷：整个检测过程仅需约10～30分钟即可完成。对于常规的3D细胞活细胞染色，仅需加入本制品避光孵育10分钟即可进行荧光检测。
| 组分 | 500T | 2500T |
| 1000×By3D Mito-Tracker Green | 50μL | 250μL |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
保存：-20℃，避光，有效期1年。
- 细胞球在外力的作用下容易变形或分散，PBS洗涤及换液等过程须轻缓，避免破坏或吹散3D细胞球。
- Mito-Tracker Green可以用于活细胞的线粒体荧光标记，但不适合用于固定细胞的标记。
- 本制品浓度经过百奥莱博的优化，确保可以满足活细胞染色及各种常规染色的需要。如需使用特定浓度的Mito-Tracker Green，请选购线粒体绿色荧光探针。
- 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。
本步骤以96孔板，每孔接种100μL细胞为例，如使用其它类型的多孔板，各试剂使用量请按照相应比例进行换算。
- 3D细胞的准备：在96孔3D培养板中每孔接种100μL细胞，细胞的接种量根据具体的实验方案，例如培养天数、需要的3D细胞球状体的大小等确定，按照3D细胞培养方案培养细胞，并按照实验设计进行一定的处理。96孔3D培养板推荐使用3D细胞培养板包被液、3D细胞培养包被试剂盒包被的U形底96孔板，或直接使用GoldBalb超低吸附96孔板、超低吸附黑色透明底96孔板等。
- 为达到最佳的使用效果，具体细胞球培养时间、药物等干预时间可以根据细胞种类、具体的实验需求等进行调整。例如，对于HCT-116细胞，通常接种培养48小时形成较为紧实的细胞球后进行干预染色效果较好。
- 3D细胞Mito-Tracker Green染色：
- 1×By3D Mito-Tracker Green的配制：如下表所示，按照96孔板每孔需要100μL 1×By3D Mito-Tracker Green的量，用PBS稀释配制适量的1×By3D Mito-Tracker Green。
样品数 10个样品 50个样品 100个样品 PBS 1mL 5mL 10mL 1000×By3D Mito-Tracker Green 1μL 5μL 10μL 总体积 ~1mL ~5mL ~10mL - 配制好的By3D Mito-Tracker Green染色工作液必须一次使用完毕，不能冻存。
- By3D Mito-Tracker Green染色工作液中探针的最终浓度可以根据不同细胞系和实验体系通过预实验进行优化。Mito-Tracker Green的工作浓度通常为0.5～2×，推荐使用浓度为1×。
- 小心去除原有细胞培养液。每孔加入100μL 1×By3D Mito-Tracker Green，在适宜于细胞培养的温度避光孵育10分钟。
- 为达到最佳的染色效果，具体染色时间可以根据细胞种类、培养天数、细胞球状大小等进行调整。
- 任何液体吸除或加入的过程须轻缓，避免破坏或吹散3D细胞球。3D细胞球通常沉浮在培养板或培养皿等培养器的底部，培养板在对着光线时能看到孔内针尖大小的乳白色细胞球，吸除孔内液体时须尽量避开细胞球以免将细胞球吸走。可以根据孔内液体的体积将移液器调至合适的量程，例如需要吸除的液体体积为100μL，将200μL移液器的量程调整到50～70μL，避开细胞球从液体边缘缓慢、分次吸除。孔内加入液体时，沿着孔壁小心、缓慢加入，避免破坏或吹散3D细胞球。
- 1×By3D Mito-Tracker Green的配制：如下表所示，按照96孔板每孔需要100μL 1×By3D Mito-Tracker Green的量，用PBS稀释配制适量的1×By3D Mito-Tracker Green。
- 荧光拍摄：染色结束后，小心去除孔内染色液，沿着孔壁缓慢加入适量的PBS洗涤细胞球1次并用完全培养基换液以终止染色，即可在荧光显微镜下观察。Mito-Tracker Green为绿色荧光探针，最大激发光波长为490nm，最大发射波长为516nm。
- 任何液体吸除或加入的过程须轻缓，避免破坏或吹散3D细胞球。
图1.本制品对于3D培养的HCT-116细胞的染色效果图。5000个HCT-116细胞使用3D细胞培养包被试剂盒包被的U形底96孔板培养72小时，然后吸除培养液后直接加入By3D Mito-Tracker Green染色液(1×)染色10分钟(图中各染料可混合配制后使用)。结果显示，By3D Mito-Tracker Green对于3D细胞染色效果清晰、明亮，By3D Mito-Tracker Green染色液染色的线粒体呈现绿色荧光(图B)，3D培养活细胞溶酶体染色液(Lyso-Tracker Red)染色的溶酶体呈现红色荧光(图C)，3D细胞Hoechst 33342染色液染色的细胞核呈现蓝色荧光(图D)，绿色荧光、红色荧光及细胞核蓝色荧光的叠加(Merge)效果见图E。实际检测效果会因细胞株、实验条件、检测仪器等的不同而存在差异，图中效果仅供参考。
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